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关于制作脑组织冷冻切片方法的改良

来源:www.timetimetime.net 时间:2019-11-07 编辑:语录

冷冻切片是一种生产方法,其中将新鲜的标本快速切片并通过低温(-18°C)染色以在短时间内达到一定的硬度。冷冻切片具有压片快,切片薄,染色好等优点,广泛应用于各级医院病理实验室,但很难在短时间内生产出高质量的冷冻切片,特别是对于生产高质量。脑组织冷冻切片更加困难。我科制作脑组织冰冻切片的方法如下。

1材料与方法

1. 1材料2012年1月至2013年12月,从我院采集148例脑组织标本。德国Leica CM1900低温恒温器,日本羽毛一次性刀片,医用偶联剂,甲醇,G修饰的苏木精染色液,醇溶性曙红,梯度乙醇和二甲苯试剂。

1. 2方法1根据所取组织的大小,在组织支持物上添加适量的医用耦合剂; 2将组织块放在包埋剂上,并用冰锤轻轻按压组织30秒钟,以使组织迅速达到较低的温度。为了防止形成冰晶,将切片机的温度控制在-14°C-16°C; 3片均匀受力,厚度8μm,在常温玻片上粘贴,放入甲醇1分钟; ill修饰的苏木精染色1分钟,直接用温水(约45°C)洗涤回蓝,曙红染色,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性胶密封。整个过程需要5到7分钟。

2个结果

148个脑组织的冷冻切片完整,厚度均匀,无皱纹刀痕,结构清晰,颜色明亮,透明,接近常规HE切片,几乎没有发现影响诊断的因素。准确率是- 99%。图1脑组织冰冻切片,结构清晰,色泽鲜艳,透明性好,细胞结构清晰,核浆染色明显。

3讨论

脑组织的冰冻切片需要快速准备膜片和准确的冰冻温度,以防止出现冰晶和细胞肿胀。特别地,脑组织富含水,质地柔软且结构疏松。很难生产高质量的冷冻切片。在生产过程中应注意以下几个方面。 1在脑组织的冷冻切片中出现冰晶的主要原因是组织未迅速冷冻到适当的温度。形成机理主要是:由蛋白质和水形成的胶体状态被破坏,水与胶体蛋白分离形成冰晶。其次,人体细胞含有约30%至40%的水,水的温度为4°C。最小的,当冷却到零以下时,水结冰,体积增加。冰晶形成后,细胞的形态发生变化。当冰晶融化时,原始组织在显微镜下被挤压并变形,留下不同大小和形状的间隙。作者使用冷冻锤轻轻按压组织,以同时冷冻组织块的上下两侧,从而达到快速冷冻组织的目的。冷冻切片机的冷冻头温度更适合于-14-16°C。如果太低,将导致组织太硬和变脆,从而影响切片的质量。其次,用生理盐水纱布包裹标本,并取下刀,蝎子等。坚持水并不容易。 2固定是冷冻切片的关键,甲醇应作为脑组织冷冻切片的固定溶液。甲醇具有固定时间短,细胞收缩小,细胞核和抗原保存良好的特点。被甲醇完全固定的脑组织具有清晰的结构,核质具有清晰的对比度,基本上保持了组织的形态结构。在过去的脑组织冰冻切片染色中,存在苏木精染色时间过长的现象。使用温水浴加热苏木精染色溶液或将苏木精染色溶液置于恒温炉中。作者使用吉尔准备吉尔。在苏木精染色液的情况下,适当加热硫酸铝铝钾水溶液,碘酸钠也可以增加30%。这样制得的苏木精染色液更加成熟,适合冷冻切片染色。苏木精染色后,可直接用温水还原为蓝色,而无盐酸和乙醇的分化,不仅节省时间,而且避免了分化控制不佳引起的染色问题。同时,用温水直接恢复为蓝色后,细胞核为蓝色,染色质澄清。核质清晰。

简而言之,脑组织冷冻切片过程中有许多因素会影响胶片的质量。这要求病理学家具有高度的责任感,并且对生产的各个方面和脑组织的特征有充分的了解和掌握。胶片的细节,在日常工作中不断摸索,总结和改进,不断缩小冷冻切片与常规石蜡切片之间的距离,并为正确诊断提供保证。

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