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关于消支饮治疗小鼠生殖道解脲支原体感染对血清干扰素-γ的影响

来源:www.timetimetime.net 时间:2019-10-19 编辑:思考

解脲脲原体(Uu)是细菌和病毒之间最小的原核微生物,属于柔韧性,支原体和脲原体属。它主要在人类泌尿生殖道的粘膜表面上寄生。女性生殖道感染后,它会上升到子宫腔和输卵管腔,引起相应部位的炎症。针对他的病因和发病机理,梁学林教授开发了一种治疗方法,该方法依靠增强脾脏和补充生命能量,促进阳光除湿,培养热量,排毒和杀死昆虫。他自制“泻止饮”来治疗这种疾病,他着重于增强身体和消除恶魔。保护正义是更合适的,特别是对于对抗生素治疗有抵抗力的患者。通过动物实验,采用中药“止痛饮”治疗Uu感染,以西药“阿奇霉素”为对照组。从Uu阴性率和血清干扰素-γ观察到“泻脂饮”的治疗效果。

1材料和试剂

1. 1实验动物104只BALB/C小鼠购自中国医学科学院实验动物研究所,8周大,雌性,干净等级,体重(20±2)g。

1. 2消脂饮的实验药物及制剂:由伪太子,山药,柴胡,知干草,陈皮,白ji,荆芥,车前子,白术,白术,黄柏,苦参等中药组成。辽宁中医药大学附属医院医药局浓缩至2 g/ml(即1毫升煎剂中2克原料药),并消毒使用。

阿奇霉素:由石家庄欧伊药业有限公司生产,规格:0.25 g /片,生产批号:国家药品标准H。

1. 3种主要试剂Uu标准菌株:Uu血清型8型冻干标准菌株,由南华大学微生物系提供。复苏后通过。

液体介质:购自珠海市丽珠试剂有限公司,批号:YZB /粤0205-2007。

固体培养基:购自上海恩康生物科技有限公司,批号:YZB/SHANGHAI 0948-40-2005。

小鼠IFN-γ定量酶联检测试剂盒:购自Adlitteramdia Gnostic Laboratories,批号:QRCT--EIA/UTL。

1。4台主要仪器设备酶联免疫吸附分析仪,anthos-2010型,用于测定血清ifn-γ;日本olympus bx51显微镜,用于uu检测小鼠阴道分泌物。

2种实验方法

2。1株uu菌剂制剂uu血清8型标准菌株于-80℃冻存于37~45℃水浴中1分钟,快速解冻,无菌接种于uu液体培养基中,37℃培养箱培养。约48h,见液体介质由黄色变为红色,且液体清澈透明,无浑浊、沉淀,uu生长可证实。取对数生长期uu菌液,浓度为2.5×105ccu/ml,于1000r/min,4℃离心备用。

2. 2动物建模在相同条件下,将它们随机分为A,B,C,D,E,F和G组。模拟Taylor-Robinson的建模方法,A,B,C组的每只小鼠, D,E,F皮下注射0.4mg苯甲酸雌二醇,浓度为1mg/ml,每周一次,共4次。用雌激素预处理后,向A,B,C,D,E和F组的小鼠注射20μl浓度为2.5×105 cuu/ml的Uu细菌溶液。阴道连续3天给予细菌。接种Uu后1周,对小鼠的阴道分泌物进行测试。使用2个无菌棉签到达小鼠阴道0.5厘米,然后轻轻旋转。第一支棉签在液体培养基(1毫升)中完全洗脱以进行液体培养。第二根棉签接种到Uu固体培养基中。在平板电脑上。固体和液体培养基均在37°C的培养箱中培养。 24至48小时后,液体介质的颜色从黄色变为红色并澄清。固体培养基上长出了典型的“卵形” Uu菌落,表明建模成功。

2. 3组药物预防高剂量消脂饮组(A组:14只小鼠,同时给予模型,给予中药“消脂饮” 80 g /(kgd),连续给药4周;低剂量预防饮酒剂量组(B组):14只小鼠,同时给予中药“消脂饮” 20 g /(kgd),连续给药4周;消脂饮治疗高剂量组(C组):17只小鼠,成功建模后,给予中药“消脂饮” 80g /(kgd),连续给药3周;消脂饮治疗低剂量组(D组):17只小白鼠,成功后建模,给予中药“消脂饮” 20 g /(kgd),连续给药3周;阿奇霉素组(E组):14只小鼠,建模成功后,给予西药“阿奇霉素0.2 g /(kgd)” ,连续给药2周;模型组(F组):16只小鼠,成功建模后,sal为0.9%给予ine 3周;空白组(G组):正常模型喂养12只小鼠,与模型组同时给药0.9%生理盐水3周。灌胃量:每天每10 g小鼠0.4 ml药液。

2. 4实验测试指标小鼠阴性率的检测:实验给药结束后,对所有小鼠的阴道分泌物进行测试。 2448 h后观察结果。在Olympus BX51显微镜下观察并拍照。

小鼠血清中IFN-γ的检测:用无菌眼科方法取出小鼠眼球,取小鼠血液,用酶联免疫吸附法检测血清IFN-γ值。

2.5统计方法:采用spss17.0统计软件对数据进行分析。计数数据的采用率用2检验表示,用lsd-t检验测量数据。p<;0.05表明差异有统计学意义。

3个结果

接种uu 1周后检测小鼠阴道分泌物。液体和固体培养基试验结果表明,a、b、c、d、e、f组小鼠感染了uu,感染率为100%,空白组12只小鼠未感染uu,感染率为0。实验证明,该模型是成功的。

3.1治疗后uu阴性率

3.2小鼠的眼球血中检测到血清IFN-γ。将出血血清离心分离。酶联免疫吸附试验(elisa)测定ifnγ值。基本步骤如下:(1)将酶标板取出,按顺序将100毫升标准品加入空白微孔中;(2)分别标记样品编号,在空白微孔中加入100毫升样品;(3)在标准孔和样品孔中加入50ml酶标液;(4)在36(+2)下孵育60分钟(?)c)和(每次洗5次板机。静置10-20秒;每孔加入底物A和B(显色剂)50ml;36(+2)避光孵育反应15min?向每个孔中加入50ml终止溶液以终止反应。

判断结果:在酶标仪上以450 nm波长读取每个孔的OD值; B=标准OD值,B0=标准0点OD值; B/B0%值是纵坐标,含标准品浓度绘制在横坐标上,标准曲线绘制在对数刻度纸上;在标准曲线上找到相应的浓度范围;灵敏度为1.0 pg/ml,并根据样品的OD值在图表上检测到相应的小鼠IFN-γ。内容。

4讨论

4. 1本实验研究结果的分析

4. 1. 1治疗后阴性转化率的分析治疗4周后,小鼠分泌物的Uu测试结果表明,消脂饮和阿奇霉素对Uu感染具有治疗作用。该实验属于急性Uu感染。从负转化率来看,阿奇霉素对急性Uu感染的抗菌作用优于消脂饮,高剂量消脂饮优于低剂量饮。

4.1.2国内外专家对ifnγ值的分析发现,uu的发病与免疫因素有关。ifnγ由活化的t细胞产生,是迟发型超敏反应(dhsr)中最重要的细胞因子。许多学者认为uu感染的发病机制与输卵管损伤有关。Shcheglovitova等人发现uu感染妇女血清ifn-γ水平升高。袁淑珍发现,输卵管支原体感染不孕妇女输卵管液中ifn-γ水平升高。她认为支原体感染引起的输卵管炎症可能与ifnγ升高有关。ifn-γ作为一种免疫细胞因子,在正常情况下对机体有保护作用;如果过度表达,会引起免疫损伤。韩燕华等。用80只小鼠研究uu感染后血清ifn-γ的变化。结果表明,消康灵Ⅱ和阿奇霉素均能降低uu感染引起的血清ifn-γ水平,提示治疗和预防对uu感染引起的血液有一定的影响。清除高水平的ifnγ。

采用酶联免疫吸附试验(elisa)检测各组小鼠血清ifn-γ。lsd-t试验显示小鼠uu感染后ifn-γ升高。治疗后:1。与模型组比较,消脂饮低剂量组与模型组比较有显著性差异(p<;0.05),说明消脂饮能降低uu感染引起的高水平ifn-γ。(2)与阿奇霉素组比较,消脂饮组与阿奇霉素组差异有统计学意义(P<;0.05),说明消脂饮对UU感染所致IFN-γ水平的降低作用大于阿奇霉素组。

通过这项实验研究,可以看出消脂饮是治疗Uu感染的有效处方。该方不仅可以有效地改善因Uu感染引起的生殖道炎症,而且可以降低因Uu感染引起的高水平的IFN-γ,并且可以调节全身的免疫功能。这与Uu与免疫因子有关的现代研究一致。的。而且,这为中药治疗Uu感染开辟了新途径,并提供了理论依据。

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